Di bawah keadaan fisiologi biasa, asid asetoasetik wujud sebagai bes konjugatnya, asetoasetat:

Asetoasetat yang tidak terikat dihasilkan terutamanya oleh mitokondrion hati daripada tioesternya dengan koenzim A (KoA):

Asetoasetat-KoA itu sendiri terbentuk melalui tiga laluan:

• 3-hidroksi-3-metilglutaril KoA membebaskan asetil KoA dan asetoasetat:−
  O
  2CCH
  2−C(Me)(OH)−CH
  2C(O)−KoA → −
  O
  2CCH
  2−Ac + Ac−KoA
• Asetoasetil-KoA boleh datang daripada pengoksidaan beta butiril-KoA :Et−CH
  2C(O)−KoA + 2NAD+
  + H
  2O + FAD → Ac−CH
  2C(O)−KoA + 2NADH + FADH
  2
• Pemeluwapan pasangan molekul asetil-KoA seperti yang dimangkinkan oleh tiolase.[4]:3932Ac−KoA → AcCH
  2C(O)−KoA + H−KoA

Dalam mamalia, asetoasetat yang dihasilkan dalam hati (bersama dengan dua "badan keton") yang lain dilepaskan ke dalam aliran darah sebagai sumber tenaga semasa tempoh berpuasa, bersenam, atau akibat diabetes melitus jenis 1.[5] Pertama, kumpulan CoA dipindahkan dengan enzim kepadanya daripada suksinil-KoA, menukarkannya kembali kepada asetoasetil-KoA; ini kemudiannya dipecahkan kepada dua molekul asetil-KoA oleh tiolase, dan ini kemudiannya memasuki kitaran asid sitrik. Otot jantung dan korteks buah pinggang lebih cenderung menggunakan asetoasetat berbanding glukosa. Otak menggunakan asetoasetat apabila paras glukosa rendah akibat berpuasa atau diabetes.[4]:394